Comment comparer des acides nucléiques (ADN ou ARN) ?
Comparaison de fragments d'ADN ou d'ARN : électrophorèse.
Principe : L'électrophorèse est une migration dans un support poreux de molécules chargées électriquement en solution, dans un courant électrique. Les acides nucléiques sont chargés (-). Le support agit comme tamis (support à mailles serrées). Plus les molécules sont petites, plus elles migrent rapidement donc plus elles seront allées loin lorsqu'on coupera le champ électrique. Deux acides nucléïques de longueur différentes ne migreront donc pas au même niveau.
Matériel :
Table d'électrophorèse
Gel d'Agarose
Bleu de toluidine
Réalisation pratique :
Utiliser un support poreux à mailles serrées : gel d'agarose, imbibé de solution saline conductrice, qui plonge à ses deux extrémités dans deux cuves de cette même solution, reliée l'une au pôle (+) et l'autre au pôle (-) du générateur.
Préparer plusieurs puits côte à côte du côté de la cathode (-) et déposer un échantillon dans chaque puits.
Mettre sous tension pendant un temps déterminé (il faut arrêter la migration avant que les molécules n'atteignent l'extrêmité du support).
Révéler ensuite les molécules par du bleu de toluidine.
Comment séparer des acides nucléiques dans un mélange ?